Hola muchachos, les traigo mi procedimiento para hacer conteo celular.
Conteo Celular
La manera mas fácil de saber si tu levadura esta buena o mala es con un microscopio y un hemocitómetro. Antes de hacer un conteo celular hay que tener la concentración correcta de levadura. Muy pocas células en suspensión y no podremos verlas para contarlas. Demasiadas células en suspensión, y estará demasiado lleno para un conteo certero.
Dependiendo de la muestra el rango de dilución es distinto.
Diluciones:
Cerveza 1:1
Cerveza fermentando 1:10 → 1:100
Levadura 1:1000
Materiales
Microscopio con al menos 400x de aumento, con luz
Hemocitometro
Cubierta de hemocitómetro
Pipetas de punta fina (1 ml)
Contador de mano
Pipetas de transferencia
Kleenex o algún pañuelo suave
Azul de metileno
Tubos de ensayo de 10 ml
Preparación de la muestra.
El paso más importante es la dilución, quieres menos de 100 células por cuadrado (5x5) a 400x.
Usar agua destilada
Tu última dilución siempre debe ser 1:1 con Azul de Metileno.
Homogeneizamos la muestra (sin burbujas o grumos)
Es importante no tener burbujas, agitamos para sacar el gas de ser necesario.
Procedimiento
Asegurarse que el hemocitómetro esté limpio y seco. Limpiar suavemente.
Ponemos el cubre objetos cubriendo ambos lados.
Llenamos con la pipeta el espacio entre el hemocitómetro y su cubierta.
Ponemos el hemocitómetro en el microscopio y observamos a 400x. Idealmente debemos tener 50 células en un cuadro de 5x5, se descarta la muestra y se prepara otra muestra con dilución mayor si se pasan de 100 células por cuadro 5x5.
Establecemos un protocolo de conteo. No contamos las que tocan las líneas, ni si una célula hija es menos de la ½ de tamaño de la madre.
Si agregamos azul de metileno, verificamos la viabilidad. Las células teñidas de azul oscuro están muertas, las de azul claro suelen ser contadas como vivas si están generando una célula hija.
Contamos todas las células y llevamos un conteo separado de las muertas (teñidas de azul oscuro).
Conteo rápido
Las células se deben ver distribuidas de una manera pareja en el hemocitómetro.
Contamos los cuadros de las 4 esquinas y el del centro, 5 cuadros en total.
Células/ml = (células contadas) * (5) * (Factor de dilución) * (10^4)
Por ejemplo:
Si tu dilución es por un factor de 1:200 y contaste 220 células en los 5 cuadros.
Calculamos:
Células/ml = 220 * 5 * 200 * 10,000 = (2,200,000,000) o 2.2 billones de células/ml